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热启动PCR预混液图片
产品货号:
SN0047
中文名称:
热启动PCR预混液
英文名称:
2×BB Antitaq PCR Mix
产品规格:
5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
简要说明:

本制品包含抗体修饰的热启动BB Antitaq DNA聚合酶、dNTPs以及优化的缓冲体系,浓度为2×,只需要添加引物、模板和ddH2O即可进行PCR扩增。使用本制品扩增的PCR产物3'端带有一个突出的"A"碱基,纯化后可直接用于TA克隆。本制品适用于常规PCR、热启动PCR。



产品组成:
组分规格
2×BB Antitaq PCR Mix1mL×5
说明书1份

保存:2~8℃,有效期1年。

注意事项:
  • 请使用高质量的模板进行扩增。
  • PCR Mix应避免反复冻融,短期内多次使用可置于4℃保存。


使用方法:
  • 按下表配制PCR反应体系(冰上操作)
    成分25μL体系50μL体系终浓度
    2×BB Antitaq PCR Mix12.5μL25μL
    引物1 (10μM)0.5μL1.0μL0.2μM
    引物2 (10μM)0.5μL1.0μL0.2μM
    模板DNA根据需要加入合适的量
    ddH2O至25μL至50μL
    模板推荐量:
    基因组DNA:10~1000ng;
    质粒DNA:1~30ng;
    cDNA:1~2μL(不超过PCR反应总体积的1/10)。
    以上为推荐的模板使用量,实际反应条件因模板、引物等的结构不同会存在一些差异,可根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。
  • 建议的PCR条件
    步骤温度时间循环数
    预变性94℃2~5min1
    变性94℃30s30~35
    退火50~68℃30s
    延伸72℃1~2kb/min
    终延伸72℃5~10min1
    -4℃Hold-


常见问题:
  • 扩增无产物或产物量少?
    • 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量,使用高质量模板。
    • 模板浓度过低。适当增加模板用量。
    • 引物不合适。优化引物设计。
    • 退火温度不合适。设置退火温度梯度,摸索合适的退火温度。
    • 循环数过少。适当增加5~10个循环。
    • 延伸时间不足。复杂模板可适当增加延伸速度至20~30s/kb。
  • 扩增出现非特异条带或弥散带?
    • 引物特异性差。优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增。
    • 引物浓度过高。降低引物浓度。
    • 模板过量或纯度差。减少模板量,使用高质量模板。
    • 退火温度过低。适当提高退火温度或使用Touchdown PCR程序。
    • 循环数过多。减少循环数至25~30个循环。

相关搜索:热启动PCR预混液2×BB Antitaq PCR Mix
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